| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| 1g |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
oxidative phosphorylation (OXPHOS); STING; TBK1; IRF3; IFN-β[1]
CCCP is a mitochondrial uncoupler that acts as a proton ionophore. It increases the permeability of mitochondrial membranes to protons, dissipating the proton gradient and uncoupling oxidative phosphorylation. This disrupts ATP synthesis and induces mitochondrial depolarization. CCCP also induces mitophagy in mammalian cells and suppresses the expression of electron transport chain proteins. |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
CCCP通过干扰STING、TBK1和IRF3之间的结合能力，阻止它们被磷酸化。CCCP并不抑制STING向核周区域的转位，但它会干扰STING及其下游信号分子TBK1和IRF3的激活。除了诱导线粒体分裂外，CCCP还会抑制STING和TBK1之间的相互作用。值得注意的是，敲低线粒体分裂调节因子Drp1后，STING活性得以恢复，这表明CCCP通过导致质子载体CCCP失去膜电位来抑制DMXAA触发的STING信号染料。当用DMXAA处理RAW264.7细胞和MEF细胞时，CCCP会显著降低IFN-β的产生[1]。1 μM的CCCP足以检测有丝分裂。在用 10 μM CCCP（用于诱导线粒体自噬的剂量）处理的细胞中，有丝分裂的诱导作用极弱。由于线粒体回避蛋白与内向运动蛋白结合，有丝分裂的机制需要将失败的线粒体定位在细胞外周 [4]。
在体外，CCCP 可诱导哺乳动物细胞发生线粒体自噬并抑制电子传递链蛋白的表达。它被用作解偶联剂来研究线粒体功能和能量代谢。CCCP 可诱导 PINK1 的激活，进而导致 Parkin Ser65 位点的磷酸化。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
分别以3 mg/kg体重的相同剂量给予CCCP和PPEF。两种情况下细菌负荷均下降了1个对数单位。然而，当3 mg/kg体重的PPEF和3 mg/kg体重的CCCP联合使用时，细菌计数下降了6个对数单位。所建立的模型[2]证实了联合治疗增强的抗菌活性。在腹腔注射CCCP（4 mg/kg）的99mSD支架中，Tc-MIBI信号显示，经CCCP处理的支架中ATP浓度降低，99mTc-MIBI信号也证实了这一点。我们检测了经CCCP处理的支架分离的心脏组织中的同位素活性，以确定CCCP是否会降低99mTc-MIBI的水平。 CCCP组心脏中99mTc-MIBI信号显著低于注射99mTc-MIBI后180分钟的心率[3]。
在体内，CCCP被用作研究线粒体功能和能量代谢的工具。其对线粒体膜电位和ATP合成的影响已在多种动物模型中得到研究。该化合物诱导线粒体自噬的能力已在体内得到证实。 |
| 酶活实验 |
抗生物膜活性测定[2]
生物膜抑制测定是通过将100 μL细菌悬液（约10⁸ CFU）接种到96孔板的孔中，并加入1XMIC PPEF、1XMIC CCCP、1XMIC PPEF + 1/2XMIC CCCP和1XMIC CCCP + 1/2XMIC PPEF，培养24小时来进行的。而对于预先形成的生物膜清除测定，首先将100 μL细菌悬液（约10⁸ CFU）在37 °C静置条件下培养24小时使其形成生物膜，然后将形成的生物膜与1XMIC PPEF、1/2XMIC CCCP和1XMIC PPEF + 1/2XMIC CCCP在37 °C下孵育24小时。两种情况下，均采用结晶紫染色法评估生物膜质量。 棋盘格法[2] 采用棋盘格法测定PPEF和CCCP联合用药的协同效应，具体方法如前所述。本研究中，我们采用的组合方案如下：CCCP的浓度固定为1/2倍MIC，PPEF的浓度进行两倍系列稀释；同样，PPEF的浓度固定为1/2倍MIC，CCCP的浓度进行两倍系列稀释。最小抑菌浓度（MIC）使用Tecan微孔板读数仪在600 nm波长处测定。联合用药的效果根据FIC指数定义，其中FIC = FIC(PPEF) + FIC(CCCP)，FIC(PPEF)为联合用药中PPEF的MIC/PPEF单独用药的MIC，FIC(CCCP)为联合用药中CCCP的MIC/CCCP单独用药的MIC。FIC的解释如下：如果 FIC > 4.0，则为拮抗作用；如果 FIC > 1 且 ≤ 4，则为无关作用；如果 FIC > 0.5 且 ≤ 1，则为相加作用；如果 FIC ≤ 0.5，则为协同作用。40,41. hr> 时间杀菌试验[2] 为了评估 PPEF、CCCP 以及 PPEF 和 CCCP 联合用药对细菌生长的影响，根据 NCCLS42 标准构建了时间-反应生长曲线。将 1 mL 细胞密度为 107 CFU mL−1 的细菌悬液分别暴露于 PPEF (1XMIC)、CCCP (0.5XMIC) 以及 PPEF (1XMIC) 和 CCCP (0.5XMIC) 联合用药中。在对照管中加入等体积的无菌 Milli-Q 水。将这些培养物在 37 °C 下以 200 rpm 的转速持续搅拌培养。在不同时间点收集肉汤等分试样，用生理盐水进行系列稀释，涂布于MH琼脂培养基上，并在37℃下培养18小时，以确定每份培养物中的总菌落形成单位（CFU）。细胞回收率通过将相应时间点处理组细胞的CFU除以未处理组细胞的CFU计算得出。 CCCP的体外酶活性测定通常测量其解偶联氧化磷酸化的能力。线粒体膜电位使用JC-1或TMRE等荧光染料进行测定。耗氧率使用克拉克型氧电极进行测定。该化合物抑制ATP合成的能力使用基于荧光素酶的测定方法进行评估。 |
| 细胞实验 |
IFN-β 诱导[1]
将 MEF (5 × 105)、Raw264.7 细胞 (1 × 106) 和稳定表达 STING 的 HeLa 细胞 (1.5 × 105) 用 DMXAA (100 μg/ml) 刺激 2 或 3 小时，或用 c-di-GMP (5 μM)、cGAMP (5 μg/ml) 或 poly (dA:dT) (2 μg/ml) 转染 6 小时。 CCCP (50 μM) 与 DMXAA (100 μg/ml) 共同处理，或在 c-di-GMP 或 poly (dA:dT) 处理的情况下，于最后 5 小时进行处理。[1] 线粒体膜电位测定[1] 将野生型和 Drp1−/− MEF (1 × 10⁵) 细胞用 CCCP (50 μM) 刺激 1 小时。细胞用 TMRM (100 nM) 染色 30 分钟，然后通过流式细胞术进行分析。 体外细胞毒性试验[2] 通过克隆形成存活试验评估 HEK293T 和 NIH/3T3 细胞对 PPEF、CCCP 及其组合的细胞活力。将两种细胞以每孔 400 个细胞的密度接种于六孔平底 Corning® costar® 细胞培养板中。20 小时后，分别加入浓度为 0.5、2、8 和 32 μg/mL 的化合物。对于 PPEF 和 CCCP 的联合处理，选择 0.5 μg/mL 和 2 μg/mL 的浓度。随后处理 24 小时，去除药物，洗涤细胞，并让细胞继续培养 10 天以形成克隆。用 0.5% 结晶紫染色克隆，并进行人工计数。 基于细胞的 CCCP 检测包括用该化合物处理各种细胞系，并测量线粒体膜电位、ATP 水平和活性氧的产生。使用共聚焦显微镜评估线粒体形态。通过蛋白质印迹法评估自噬和线粒体自噬标志物。 |
| 动物实验 |
Balb/c小鼠中性粒细胞减少性大腿感染模型[2]
每组6只体重20-25 g的雌性Balb/c小鼠，在细菌感染前4天和1天分别腹腔注射环磷酰胺150 mg/kg体重和100 mg/kg体重，使其处于中性粒细胞减少状态。将0.1 mL浓度为10⁶ CFU/mL的细菌悬液注射到小鼠右侧大腿后侧肌肉。感染2小时后，小鼠分别接受PPEF（3 mg/kg体重）、CCCP（3 mg/kg体重）以及PPEF + CCCP（3 mg/kg体重 + 3 mg/kg体重）联合治疗，所有药物均溶于0.1 mL无菌水中，通过单次静脉推注给药。抗菌药物给药24小时后，对小鼠实施安乐死。无菌采集每只小鼠的右大腿肌肉，匀浆后进行系列稀释，并进行定量培养。 在本研究中，研究人员分析了用羰基氰化物间氯苯腙（CCCP，一种已知可降低线粒体膜电位的线粒体解偶联剂）灌注的Sprague-Dawley (SD)大鼠心脏中的(99m)Tc-MIBI信号。(99m)Tc-MIBI信号可用于检测线粒体膜电位的变化，其灵敏度与使用阳离子探针四甲基罗丹明乙酯（TMRE）的双光子激光显微镜相当。他们还测量了腹腔注射CCCP（4 mg/kg）或载体的SD大鼠心脏中的(99m)Tc-MIBI信号。在给予CCCP的大鼠心脏中，(99m)Tc-MIBI信号降低，同时，通过(31)P磁共振波谱法测得的ATP含量也降低。接下来，研究人员给喂食高盐饮食的Dahl盐敏感性大鼠注射(99m)Tc-MIBI，高盐饮食会导致高血压和心力衰竭。每单位心脏组织重量的(99m)Tc-MIBI信号与心脏重量、心脏功能以及心房利钠因子（一种心力衰竭标志物）的表达呈负相关，而与标记脂肪酸类似物的积累呈正相关。每单位肝脏组织重量的(99m)Tc-MIBI信号低于每单位心脏组织重量的(99m)Tc-MIBI信号。[3] 由于CCCP的毒性，其体内动物研究受到限制。该化合物通常用于研究特定组织中的线粒体功能和能量代谢。研究评估其对线粒体膜电位和ATP水平的影响。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
代谢/代谢物
有机腈在肝脏中经细胞色素P450酶转化为氰离子。氰离子被迅速吸收并分布于全身。氰离子主要经硫氰酸氧化酶或3-巯基丙酮酸硫转移酶代谢为硫氰酸。氰化物代谢物经尿液排出。(L96) CCCP的药代动力学特性尚未得到充分表征。该化合物是一种亲脂性弱酸，可穿过生物膜。体外研究通常将其溶解于DMSO或甲醇中。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
毒性概述
有机腈在体内和体外均可分解为氰离子。因此，有机腈的主要毒性机制是产生有毒的氰离子，即氰化氢。氰离子是第四电子传递链复合物（位于真核细胞线粒体膜上）中细胞色素c氧化酶的抑制剂。它与该酶中的铁原子形成复合物。氰离子与该细胞色素的结合阻止了电子从细胞色素c氧化酶传递到氧气。结果，电子传递链被破坏，细胞无法进行有氧呼吸以产生ATP供能。主要依赖有氧呼吸的组织，例如中枢神经系统和心脏，尤其容易受到这种影响。氰化物还可以通过与过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶、高铁血红蛋白、氢钴胺素、磷酸酶、酪氨酸酶、抗坏血酸氧化酶、黄嘌呤氧化酶、琥珀酸脱氢酶和铜/锌超氧化物歧化酶结合而产生一些毒性作用。氰化物与高铁血红蛋白中的铁离子结合形成无活性的高铁血红蛋白氰化物。(L97) CCCP是一种有毒化合物，可诱导活性氧介导的细胞死亡。在实验室环境中处理CCCP时应极其谨慎。该化合物的毒性与其破坏线粒体功能和诱导氧化应激的能力有关。 |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
CCCP属于一氯苯类化合物，其结构由一个2-(1,3-二硝基丙烷-2-基)酰肼基团和一个分别取代在苯环1位和3位的氯原子组成。它是一种线粒体去极化剂，可诱导活性氧介导的细胞死亡。它具有抗衰老、抗菌和离子载体特性。CCCP是一种腈类化合物，属于腙类，也是一种一氯苯类化合物。它的功能与腙丙二腈类似。羰基氰化物间氯苯腙是一种氰化物化合物。它是一种质子离子载体。由于其对线粒体和叶绿体膜的影响，CCCP常被用作解偶联剂和光合作用抑制剂。CCCP是研究线粒体功能、氧化磷酸化、自噬和线粒体自噬的常用研究工具。它尚未获准用于治疗用途。该化合物对于研究线粒体在健康和疾病中的作用具有重要价值。
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| 分子式 |
C9H5CLN4
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|---|---|
| 分子量 |
204.617
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| 精确质量 |
204.02
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| 元素分析 |
C, 52.83; H, 2.46; Cl, 17.33; N, 27.38
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| CAS号 |
555-60-2
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| 相关CAS号 |
555-60-2;
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| PubChem CID |
2603
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| 外观&性状 |
Yellow to brown solid powder
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| 密度 |
1.26 g/cm3
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| 沸点 |
318.3ºC at 760 mmHg
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| 熔点 |
170-175 °C (dec.)
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| 闪点 |
146.3ºC
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| 折射率 |
1.611
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| LogP |
2.228
|
| tPSA |
71.97
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
4
|
| 可旋转键数目(RBC) |
2
|
| 重原子数目 |
14
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| 分子复杂度/Complexity |
300
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| InChi Key |
UGTJLJZQQFGTJD-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C9H5ClN4/c10-7-2-1-3-8(4-7)13-14-9(5-11)6-12/h1-4,13H
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| 化学名 |
Carbonyl cyanide 3-chlorophenylhydrazone
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| 别名 |
CCCP; Mesoxalonitrile 3-chlorophenylhydrazone; Carbonyl cyanide 3-chlorophenylhydrazone; (3-Chlorophenyl)hydrazonomalononitrile; Carbonyl cyanide m-chlorophenylhydrazone; Carbonylcyanide-3-chlorophenylhydrazone; Carbonyl cyanide m-chlorophenyl hydrazone; m-Chlorophenyl carbonylcyanide hydrazone;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~50 mg/mL (~244.36 mM)
H2O : < 0.1 mg/mL |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (12.22 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80+，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 4.8871 mL | 24.4355 mL | 48.8711 mL | |
| 5 mM | 0.9774 mL | 4.8871 mL | 9.7742 mL | |
| 10 mM | 0.4887 mL | 2.4436 mL | 4.8871 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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